Am 15. Mai 1501 veröffentlichte er mit den „Harmonice Musices Odhecaton A“ die erste Sammlung gedruckter polyphoner Musik. Sie umfasste 100 weltliche Lieder. Das Ergebnis bestach durch seine Exaktheit und hohe Qualität, einen Vorzug, den etwas später entwickelte Verfahren, die die drei Arbeitsgänge zu einem einzigen vereinten, zunächst nicht erreichten. Heute kennt man über 60 Publikationen von Ottaviano Petrucci: Neben weiteren weltlichen italienischen Liedern (Frottole) druckte er auch geistliche Musik wie Motetten (mehrstimmiger Chorgesang) und Messen – darunter Kompositionen der damals berühmtesten franko-flämischen Komponisten wie Josquin Desprez und Antoine Brumel – sowie Lautenmusik. Petrucci trug so dazu bei, den Musikdruck als eigenständigen Bereich im Medienwesen zu etablieren.
